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    固相萃取儀基本操作四步走介紹

    來源:技術文章    發布時間:2021-06-15    瀏覽:110次
       固相萃取儀(SPE)是近年發展起來一種樣品預處理技術,由液固萃取和柱液相色譜技術相結合發展而來,主要用于樣品的分離、純化和濃縮,與傳統的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率,更有效的將分析物與干擾組分分離,減少樣品預處理過程,操作簡單、省時、省力。廣泛用在醫藥、食品、環境、商檢、化工等領域。
      固相萃取儀操作“四步走”規定:
      1.活化
      萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml溶劑沖洗濾膜使SPE填料保持濕潤,因為填料干燥會降低樣品保留值,而各小柱的干燥程度不一,也會影響回收率的重現性。先用甲醇等水溶性有機溶劑沖洗填料,因為甲醇能潤濕吸附劑表面,并滲透到非極性的硅膠鍵合相中,使硅膠更容易被水潤濕;然后再加入水或緩沖液沖洗,創造和樣品溶劑相容的環境并提高回收率。
      2.上樣
     ?、儆?.1mol/L酸或堿調節,使pH=9,離心取上層液萃??;
     ?、谟眉状?、乙腈等沉淀蛋白質后取上清液,以水或緩沖液稀釋后萃??;
     ?、塾盟峄驘o機鹽沉淀蛋白質后取上清液,調節pH值后萃??;
     ?、艹?5min后加入水、緩沖液,取上清液萃取。流速應控制為1ml/min,流速快不利于待測物與固定相結合。
      3.淋洗
      反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液,可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調節pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個小柱的容積,而SPE濾膜為5-10ml。
      4.洗脫
      應選用5-10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度,則可先將洗脫液揮干后,再用流動相重組殘留物后進樣。體內樣品洗脫后多含有水,可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物。
      若待測物可電離,可調節pH值,抑制樣品離子化,以增強待測物在反相SPE填料中的保留,洗脫時調節pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫,收集洗脫液后再調節pH值使其在HPLC分析中達到理想分離效果。在洗脫過程中應減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫,回收率更高。
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